跪求真菌菌絲體全蛋白提取方法
一、 材料與試劑準備:
1.鮮菌絲體或冷凍菌絲體樣本
2.蛋白提取緩衝液(通常包括:Tris-HCl、NaCl、EDTA、Triton X-100、PMSF等,具體成分可根據目標蛋白的特性進行調整)
3.液氮
4.清潔的研磨器或研磨珠
二、操作步驟:
1.收集鮮菌絲體,用清水清洗,去除多餘的培養基和雜質,然後用濾紙吸去多餘的水分。
2.如果是鮮菌絲體,可以將其冷凍至-80°C並存儲,或者立即進行下一步。冷凍可以幫助破碎菌絲體。
3.在液氮中使用研磨器將菌絲體研磨成粉末。
4.將研磨好的菌絲體粉末轉移到離心管中,加入適量的蛋白提取緩衝液。
5.於4°C下振盪混合約30分鐘,充分釋放蛋白。
6.於4°C下高速離心10-15分鐘。
7.收集上清液,該液中包含提取的蛋白。
8.使用蛋白濃度測定方法(例如Bradford法)測定蛋白濃度。
三、注意事項:
1.蛋白提取過程中要儘量在低溫環境下操作,以防蛋白降解。
2.根據需要,可以在蛋白提取緩衝液中新增蛋白酶和磷酸酶抑制劑。
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