做western blot時,蛋白轉到膜上了,但是marker看不到,為什麼marker沒轉上呢?
這個問題涉及到的是Western Blot實驗過程中的一個常見現象,當我們不能在膜上看到marker(蛋白分子量標記)的時候,可能的解釋有很多。以下四點可能是主要的原因:
1.蛋白Marker的選擇:
Marker的選擇應該取決於目的蛋白的分子量。如果marker的分子量與目的蛋白過於接近,或者marker的分子量超出了目的蛋白的範圍,那麼在電泳和轉膜過程中可能就會看不到marker。
2.Gel和blotting條件的選擇:
實驗中用於電泳和轉膜的引數(如電壓、時間、溫度等)需要與所用marker和目的蛋白相對應。如果引數設定不當,也可能會導致marker檢測不到。
3.顯色劑:
實驗中使用的顯色劑可能會影響到marker的顯示。比如顯色劑選擇不當、顯色時間過長或是顯色劑未完全覆蓋整個樣品可能都會導致marker的顏色淡化,甚至無法被看到。
4.Marker的損失或降解:
這可能是由於樣品準備過程中的操作問題,如復溶不充分,儲存條件不適當引起的marker降解,或者在轉膜過程中丟失。
上述原因並不全面,還可能有其他因素。具體情況需要結合實驗的細節來分析。對於此問題,專業的解決策略應包括詳細檢查實驗步驟,最佳化實驗條件,並考慮更換新的marker來進行確認。
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