免疫共沉澱 Co-IP 實驗原理是什麼?
免疫共沉澱(Co-IP)是一個用於檢測兩種或多種蛋白質之間在細胞內是否存在物理互作的技術。其原理是基於抗體的特異性結合能力,利用抗體與目標蛋白質結合形成免疫複合物,然後透過沉澱技術將免疫複合物與其它相互作用的蛋白質一起沉澱下來,從而實現對目標蛋白質與其相互作用蛋白質的檢測:
特異性抗體與目標蛋白質的結合:實驗中使用的特異性抗體能夠識別並結合到目標蛋白質上。這個目標蛋白質可能與其他蛋白質形成複合物。
1.沉澱蛋白質複合物:
當抗體結合到目標蛋白質上後,我們可以使用A/G蛋白質磁珠或A/G瓊脂糖珠等配體來沉澱整個蛋白質複合物。A/G蛋白質磁珠或A/G瓊脂糖珠可以與抗體的Fc區域特異性結合,因此,當這些珠子結合到抗體時,它們也會沉澱抗體所結合的目標蛋白質及其與之相互作用的所有蛋白質。
2.檢測蛋白質相互作用:
一旦將蛋白質複合物沉澱下來,就可以使用各種方法(例如西方印跡)來檢測沉澱物中的蛋白質,並驗證是否有其他蛋白質與目標蛋白質相互作用。如果在沉澱物中檢測到了與目標蛋白質相互作用的蛋白質,那麼就可以確認這兩種蛋白質在細胞記憶體在物理互作。
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