大分子量(500kda)蛋白做westernblot怎麼做呢?
處理大分子量(例如500 kDa)的蛋白進行Western Blot實驗時,可能需要調整一些實驗引數以確保蛋白能夠被有效地分離和檢測。如下所述:
1. 凝膠的選擇:
使用較低濃度的聚丙烯醯胺凝膠(例如4-8%)可以更好地分離大分子量的蛋白。
2. 電泳條件:
使用低電壓執行凝膠。這有助於防止蛋白質的過度加熱和變性,同時允許大分子量蛋白有足夠的時間透過凝膠。
3. 轉膜條件:
可以考慮使用溼轉膜方法,因為它通常比半乾轉膜方法更有效地轉移大分子量蛋白。延長轉膜時間或使用更高的電流可能有助於確保大分子量蛋白完全轉移到膜上。
4. 選擇合適的轉移膜:
對於大分子量蛋白,使用聚偏氟乙烯(PVDF)膜通常比使用硝酸纖維素膜更有效。
5. 阻斷和雜交條件:
確保使用足夠的時間和合適的溫度進行抗體的雜交和洗滌,以最大限度地減少背景並增強特異性訊號。
6. 使用適合檢測大分子量蛋白的標記物:
選擇一個分子量標準,該標準包括大分子量蛋白的標記,以確保可以準確地確定你的蛋白的遷移。
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