大分子蛋白（220kd）wb怎麼跑出清晰的條帶？
大分子蛋白（如220 kDa）在Western Blot（WB）中有時可能難以獲得清晰的條帶，因為這些蛋白質的遷移和轉移可能會受到影響。希望以下建議可以幫助您在進行大分子蛋白WB電泳時獲得清晰的條帶：
1.凝膠選擇：
使用較低濃度的凝膠（例如6%或8%）來增加孔隙大小，從而更好地解決大分子蛋白。
2.電泳條件：
使用較低的電壓進行電泳。例如，可以選擇在80-100V下執行整個凝膠。這有助於防止蛋白過快遷移並避免凝膠過熱。
增加電泳時間，使大蛋白有足夠的時間遷移。
3.轉移條件：
大蛋白的轉移通常比較困難。考慮使用溼式轉移並延長轉移時間。例如，可以考慮在30V下轉移 overnight。
使用0.45μm的PVDF或硝酸纖維素膜。PVDF膜對於大蛋白的結合特性較好。
確保轉移緩衝液中包含適量的甲醇（通常為20%）。甲醇可以增加孔隙大小，幫助大分子蛋白的轉移。
考慮使用低冷的轉移緩衝液或使用冷凍裝置，以避免過度加熱。
4.樣品製備：
仔細進行樣品製備，確保充分變性和還原，以便大分子蛋白完全展開。
避免使用過多的樣品，這可能導致條帶模糊。
5.染色和檢測：
使用高靈敏度的檢測方法，因為大蛋白的轉移效率可能較低。
在實驗之初，使用快速染色（例如Ponceau S染色）檢查蛋白的轉移效果，再根據需要調整轉移條件。
6.其他因素：
使用新鮮的電泳和轉移緩衝液。
確保蛋白樣品不含雜質或沉澱，這可能影響電泳效果。
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