WB實驗什麼時候煮蛋白?
"煮蛋白"(或稱為“沸騰樣品”)是指將蛋白樣品在高溫下加熱一段時間,以實現蛋白質的變性,這通常涉及到將含有蛋白質的樣品與一個含有SDS和減少劑(如β-mercaptoethanol或DTT)的載入緩衝液混合,並在沸水浴中加熱5-10分鐘。
一般在SDS-PAGE凝膠電泳之前,樣品提取完成並與載入緩衝液混合均勻後,就可以進行加熱變性。加熱變性後,樣品可以立即用於SDS-PAGE,然後進行Western Blot。
需要注意的是,某些敏感或容易降解的蛋白質可能不需要長時間的加熱,或者可以在稍低的溫度下加熱。但對於大多數蛋白質,常規的沸騰處理是有效和必要的。
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