用SDS-凝膠電泳法測定蛋白質分子量時，有哪些注意事項？

SDS-PAGE凝膠電泳法是測定蛋白質分子量最常用最簡單的方法，其實驗結果也容易受到多方面的影響，因此操作時也需要注意以下注意事項：

 

1.樣品製備：

• 確保蛋白質完全變性：在樣品中加入適量的SDS和減少劑（如β-mercaptoethanol或DTT）並在推薦的溫度下加熱一定時間，以確保蛋白質完全展開並斷裂二硫鍵。
• 避免蛋白降解：確保使用新鮮的樣品和緩衝液，並避免長時間儲存。

 

2.凝膠的選擇：

• 根據目標蛋白的分子量選擇合適的凝膠濃度。例如，對於較高分子量的蛋白，使用低濃度的凝膠（如6-8%），而對於較低分子量的蛋白，使用高濃度的凝膠（如12-15%）。

 

3.標準蛋白質分子量標記：

• 使用合適範圍的分子量標記，以便於與您的樣品進行比較。
• 確保分子量標記是在與樣品相同的條件下變性的。

 

4.電泳條件：

• 使用恆定的電流或電壓，以確保電泳的穩定性。
• 避免過熱：確保電泳槽有足夠的散熱和冷卻。

 

5.染色和去染：

• 使用合適的染色方法，例如考馬斯亮藍、銀染或其他特定的染色方法。
• 若使用背景去染步驟，注意避免過度去染。

 

6.分析：

• 使用適當的軟體或工具來分析蛋白質條帶的位置。
• 使用分子量標記來生成一個標準曲線，從而計算目標蛋白的分子量。

 

7.避免汙染：

• 始終使用清潔的工具、管子和緩衝液。不要重複使用已經含有SDS或其他化學品的工具。

 

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