Western 印跡法中,硝酸纖維素膜上的蛋白質,已經被SDS變性,為什麼一抗還能識別?一抗識別的是什麼?
在Western印跡法中,如果硝酸纖維素膜上的蛋白質已經被SDS變性,但一抗仍然能夠識別,可能的原因是:
1.蛋白質轉移與膜結合後的結構:
當蛋白被轉移到硝酸纖維素膜上時,它們會緊緊地與膜結合。這種結合可能會導致部分蛋白的二級結構或三級結構在一定程度上恢復,從而使某些表位重新暴露出來
2.蛋白質的線性結構:
蛋白質的一抗通常是針對蛋白質的特定線性結構(例如特定的氨基酸序列)設計的。即使蛋白質經過SDS變性,其線性結構仍然保留,一抗仍然可以與目標蛋白質的特定區域結合。
3.抗體種類:
首先,抗體的型別決定了其能否識別變性的蛋白。有些抗體是針對蛋白質的原生結構或空間結構製備的(這類抗體通常被稱為"conformational antibodies"),這些抗體可能無法識別已經被SDS變性的蛋白。但還有另一類抗體是針對蛋白質的線性或連續的肽段製備的(被稱為"linear antibodies"),這類抗體可以識別被變性的蛋白。
4.阻塞和孵育過程:
在Western blot實驗中,膜上的非特異位點通常會被阻塞劑(如脫脂牛奶或牛清蛋白)阻塞,這也可以幫助改善抗體的結合特異性。
因此,即使蛋白在SDS-PAGE中被變性,其線性結構的部分表位仍然可以被特異性抗體識別,這就是為什麼在Western blot實驗中,我們仍然可以用抗體檢測到目標蛋白的原因。
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