為啥我跑sds-page的時候不是一直線?我用乙醇沉澱蛋白,碳酸氫銨復溶?
SDS-PAGE 是一種常用的蛋白質分離技術,用於根據蛋白質的分子量進行分離。如果你的結果不是一條直線,可能有以下幾個原因:
1.樣品載入量過多或過少:
如果你載入的樣品量過多,可能會導致帶狀模糊或重疊;如果載入的樣品量過少,可能會導致帶狀模糊或訊號弱。建議最佳化樣品載入量,使其適中。
2.樣品預處理不當:
在進行 SDS-PAGE 前,樣品通常需要進行預處理,如蛋白質提取、濃縮和變性。如果預處理不當,可能會影響結果的清晰度。建議仔細選擇和最佳化樣品預處理方法。
3.膠液配製不當:
SDS-PAGE 膠液的配製需要精確的比例和 pH 值。如果配製不當,可能會導致膠液聚合不均勻或 pH 值偏離理想範圍,進而影響結果的清晰度。建議仔細按照實驗方案准確配製膠液。
4.電泳條件不當:
電泳條件包括電壓、電流和時間等引數。如果電泳條件不合適,可能會導致帶狀模糊、擴散或偏移。建議最佳化電泳條件,確保引數設定正確。
如果你想要用乙醇沉澱蛋白,再用碳酸氫銨復溶,那你可能需要注意:
乙醇沉澱可能會導致蛋白質的聚集或損失,從而影響 SDS-PAGE 的結果。建議在乙醇沉澱後進行蛋白質的溶解和變性處理,以確保蛋白質的完整性和穩定性。
碳酸氫銨的使用可能會導致 pH 值的變化,從而影響 SDS-PAGE 膠液的 pH 值和電泳結果。建議在使用碳酸氫銨進行蛋白質復溶時,注意控制 pH 值的變化,並在復溶後進行必要的調整。
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