GFP蛋白提純 FPLC後SDS page一直有兩個band，如何精確提純？
如果GFP蛋白在經過快速蛋白液相色譜（FPLC）提純後在SDS-PAGE上出現兩個band，可能有幾種原因：
1.部分蛋白降解：
這可能導致出現比預期分子量小的額外條帶。
2.翻譯後修飾：
例如，磷酸化、糖基化等可能增加蛋白的分子量。
3.異構體或多型性：
GFP的某些形式可能存在不同的構象或異構體。
4.其他雜質：
雖然經過FPLC提純，但可能仍然含有與GFP分子量相近的雜質。
要想進一步精確提純GFP，可以考慮以下幾種策略：
1.最佳化FPLC條件：
根據你使用的FPLC柱（例如凝膠滲透、離子交換或親和色譜柱），可以嘗試更嚴格的洗脫梯度或更合適的緩衝液來提高分離效率。
2.使用二次色譜步驟：
例如，首先使用親和色譜進行粗略提純，然後使用凝膠滲透或離子交換色譜進行進一步的純化。
3.提高樣品的處理和提取條件：
確保在提取和處理過程中新增足夠的蛋白酶抑制劑，並儘可能快速地處理樣品以減少蛋白降解。
4.進行熱處理：
某些蛋白對熱穩定，而某些雜質可能不是。可以考慮在一定溫度下進行短暫加熱，然後冷卻並離心去除不穩定的蛋白。
5.做一個控制：
透過將GFP基因轉入一個不同的宿主表達系統，來看是否還會產生兩個band。這可以幫助確定問題是否與特定的細胞系統有關。
6.蛋白切割試驗：
使用蛋白酶對GFP樣品進行部分消化，然後在SDS-PAGE上執行，以確定兩個條帶之間是否存在任何重疊。這可以幫助確定是否真的有兩種不同的蛋白形式存在。
透過上述策略，可以嘗試進一步提純GFP蛋白並理解為什麼在SDS-PAGE上出現兩個band
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