在做SDS-PAGE時候怎麼算蛋白上樣量？

確定上樣量的目標是使得電泳後的蛋白質條帶清晰可見，但又不至於過於集中導致條帶模糊。

 

首先，你需要知道你的樣品中蛋白質的濃度。這通常透過Bradford、BCA、Lowry等蛋白質濃度測定方法來實現。這些方法將提供一個蛋白質濃度的測量值，通常以微克/微升（µg/µl）為單位。一般來說，對於大部分的SDS-PAGE實驗，每個樣品孔的上樣量通常在10-50微克之間。具體的上樣量取決於你的實驗目的和樣品的性質。

 

一旦你確定了你的樣品中蛋白質的濃度和你想要的上樣量，你就可以計算出需要上樣的體積。

 

公式是：上樣體積（µl） = 上樣量（µg） / 蛋白質濃度（µg/µl）。

 

在SDS-PAGE實驗中，樣品需要與上樣緩衝液混合，然後在高溫下煮沸以使蛋白質變性。因此，你需要考慮上樣緩衝液的體積，以確保你的樣品體積加上樣品緩衝液的體積不會超過凝膠孔的容量。

 

下面透過一個具體例子來說明：

 

1.假設你的蛋白質濃度是2 µg/µl，你想要上樣的量是20 µg，那麼你需要上樣的體積就是20 µg / 2 µg/µl = 10 µl。

 

2.如果你的上樣緩衝液體積是5 µl，那麼你的總上樣體積就是10 µl + 5 µl = 15 µl，這個體積應該是可以容納在你的凝膠孔中的。

 

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