蛋白質電泳技術的種類有哪些，其原理和實驗方法是什麼？
- 樣品準備：蛋白樣品用含SDS的緩衝液混合，煮沸5分鐘。
- 載入樣品：將樣品加入聚丙烯醯胺凝膠中的樣品槽。
- 電泳：應用恆定電壓進行電泳，使蛋白向陽極遷移。
- 染色與脫色：用考馬斯亮藍或銀染液染色，再進行去色以觀察帶。
- 將蛋白樣品載入到一個pH梯度的聚丙烯醯胺凝膠條上。
- 應用電壓。蛋白會根據其等電點在pH梯度中移動並定位。
- 完成IEF後，整個凝膠條常會在降低pH的一端進行簡短的SDS處理，使蛋白質線性化並賦予它們均一的負電荷。
- 將處理過的IEF凝膠條放在SDS-PAGE凝膠的頂部，並用凝膠封住。
- 進行SDS-PAGE電泳，使蛋白質根據其分子量垂直於第一維進行遷移。
- 對二維電泳後的凝膠進行染色（如Coomassie藍或銀染）。
- 使用掃描器或專用的影象採集裝置捕獲影象。
- 用專用軟體進行分析，確定蛋白質的定位、大小和豐度。
- 使用特殊的化學試劑製備pH梯度。這些化學試劑被稱為"carrier ampholytes"。
- 將樣品載入到含有pH梯度的聚丙烯醯胺凝膠中。
- 施加電壓。蛋白會在pH梯度中遷移，直到它們達到它們的等電點並停止移動。
- 通常，完成IEF後，可以進行SDS-PAGE或其他二維電泳技術進一步分離。
- 將含有carrier ampholytes的樣品載入到電泳毛細管或聚丙烯醯胺凝膠中。
- 透過施加電壓，carrier ampholytes遷移並建立pH梯度。
- 在此pH梯度中，蛋白質或其他分子會遷移到它們的等電點並在那裏“聚焦”。
- 一旦完成，可以使用UV或其他檢測方法來檢測聚焦的帶。
蛋白質電泳技術是一種在電場作用下，使蛋白質沿電泳介質移動的技術。蛋白質的移動速度與其大小、電荷和形狀有關。以下是一些常用的蛋白質電泳技術及其原理和實驗方法：
一、連續系統SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)
1.原理：
SDS是一種陰離子表面活性劑，能與蛋白質結合，使其呈線性並賦予負電荷。在電場下，SDS結合的蛋白質主要按大小遷移，與其原始電荷無關。
2.實驗方法：
二、不連續系統SDS-PAGE
1.原理：
與連續系統相似，但具有兩種不同濃度的凝膠：分集凝膠和分離凝膠。這種設計使蛋白在進入分離凝膠之前被“集中”在一起，從而提高了解析度。
2.實驗方法：
與連續系統類似，但製備時需要注意兩層凝膠的製備。
三、Native-PAGE
1.原理：
不使用SDS，因此蛋白在電場中的遷移速度與其大小、電荷和形狀都有關。
2.實驗方法：
基本步驟與SDS-PAGE相似，但不加SDS。染色方法也相似。
四、Blue Native-PAGE
1.原理：
類似於Native-PAGE，但使用考馬斯亮藍作為非特異性染料，使蛋白呈負電荷。
2.實驗方法：
與天然PAGE類似，但加入考馬斯亮藍。
五、二維電泳 (2D-PAGE)
1.原理：
二維電泳結合了兩種蛋白質分離技術。第一維是等電點聚焦（IEF），根據蛋白的等電點（pI）進行分離；第二維是SDS-PAGE，根據蛋白的分子量進行分離。這種組合使得蛋白可以在二維平面上被高度分離。
2.實驗方法：
第一維 - IEF：
第二維 - SDS-PAGE：
染色與影象分析：
六、等電點聚焦 (IEF)
1.原理：
IEF是一種電泳技術，根據蛋白質或其他分子的等電點 (pI) 進行分離。在此pI上，蛋白的淨電荷為零，因此在電場中不再遷移。IEF使用一個pH梯度，使分子遷移到它們的等電點並在那裏“聚焦”。
2.實驗方法：
七、電泳膠中的等電點聚焦 (cIEF)
1.原理：
cIEF是IEF的一個變種，主要區別在於pH梯度的建立。在cIEF中，pH梯度是透過在聚丙烯醯胺凝膠中電泳一組預選的carrier ampholytes來產生的。
2.實驗方法：
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