請問非變性的蛋白電泳怎麼做呀？

非變性蛋白電泳（Native PAGE，Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一種在非變性條件下進行的蛋白質分離技術。非變性蛋白電泳的目的是在保持蛋白質的原有結構和生物活性的情況下，根據蛋白質的電荷、形狀和大小進行分離。非變性電泳操作相對簡單，具體步驟如下：




1. 準備聚丙烯酸凝膠:

• 選擇適當的聚丙烯酸凝膠濃度，一般在5-20%之間，濃度越高分離分子量越小的蛋白質。
• 按照實驗需求配製聚丙烯酸凝膠溶液，包括解決方案A（丙烯酸醯胺，Tris螯合緩衝區pH 6.8或8.8）和B（雙縮水甘油酯）。
• 將A和B混合，加入TEMED（N，N，N’，N’-四甲基乙二胺）和APS（二硫酸銨）作為引導聚合。
• 將混合物倒入裝有玻璃板的電泳槽中，等待凝膠凝固，同時注意避免氣泡的產生。




2. 樣品準備與載入

• 將待測蛋白樣品溶解在非變性樣品緩衝區（不含SDS和還原劑），以保持蛋白的天然構象。
• 根據實驗要求，選擇合適的電泳標記，如染料前驅體或分子量標準。
• 在凝膠槽上方設定電泳梯度，裝載樣品和標記。




3. 執行電泳：

• 選用適當的電泳緩衝液，如 Tris-Glycine 緩衝液。
• 確保聚丙烯酸凝膠浸泡在電泳緩衝液中，移除任何氣泡。
• 設定適當的電壓和電泳時間。通常情況下，初始電壓設定為100V，一旦樣品進入隔欄凝膠，提高電壓至150-200V。




4. 非變性電泳後處理：

• 將聚丙烯酸凝膠從電泳槽中取出，可以進行染色以觀察蛋白質的分佈。使用金屬敏感染料（如Coomassie Blue）或銀染進行染色。
• 對蛋白質進行懲罰、剪下和提取後，可進行質譜、免疫印跡等後續實驗。




請注意，非變性蛋白電泳的資料只能提供蛋白質的電泳遷移資訊，而不能直接提供蛋白質的準確分子量。根據實驗需求，也可以考慮使用其他蛋白質分離技術，如二維電泳、實現電泳或堆疊電泳。




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