蛋白電泳過後，條帶蛋白如何分離純化？

在SDS-PAGE電泳後，如果你希望從膠塊中回收某一特定的蛋白條帶，可以透過以下步驟進行純化：




1.膠片染色和去色：

• 首先，將整個電泳膠用適當的染料（如考馬斯亮藍）進行染色。
• 經過一定時間後，用去色液去色，直至所需的蛋白條帶清晰可見。




2.切割膠塊：

使用乾淨、鋒利的刀片或剪刀，沿著染色的蛋白條帶切割膠片，儘量減少膠塊周圍不含蛋白的部分。




3.蛋白質萃取：

• 將切下的膠塊放入一個微量離心管中。
• 新增適當的萃取液（如：50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 含有0.1% SDS或其他適當的緩衝液）。
• 膠塊在該溶液中搖勻或振盪一段時間，使蛋白從膠塊中擴散到液體中。
• 透過離心，收集液體中的蛋白溶液，並棄去膠塊。




4.蛋白質濃縮和進一步純化：

• 使用蛋白濃縮管（如Amicon或其他品牌的超濾裝置）可以濃縮蛋白溶液。
• 根據需要，可以使用其他純化方法，如親和層析、離子交換層析或凝膠滲透層析，進一步純化或富集特定的蛋白。




5.蛋白質鑑定：

爲了確認已經純化的蛋白質的身份，可以使用質譜技術或其他生化分析方法進行鑑定。




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