蛋白電泳時,為什麼經濃縮膠壓成一條線後,達到分離膠後會再次變寬?
在SDS-PAGE電泳過程中,蛋白質樣品首先被載入到濃縮膠(或叫堆疊膠)上,然後穿越濃縮膠進入分離膠(或叫分辨膠)。這兩種膠的作用和性質都不同:
1.濃縮膠(堆疊膠):
它的聚丙烯醯胺濃度較低,孔隙大小較大。蛋白在此膠中不是按分子量分離的,而是主要爲了使所有的蛋白質集中到一個相對狹窄的區域,形成一個清晰的開始線。這有助於提高後續在分離膠中的解析度。
2.分離膠(分辨膠):
它有較高的聚丙烯醯胺濃度,孔隙相對較小。當蛋白質從濃縮膠進入分離膠時,它們開始按照大小(分子量)分離。小的蛋白質在孔洞中移動得更快,而大的蛋白質移動得較慢。因此,經過分離膠後,原本在濃縮膠中被壓縮為一條線的蛋白樣品開始逐漸展寬,並形成不同大小的蛋白質帶。
所以,蛋白質樣品在濃縮膠中被集中後,在分離膠中由於大小的差異而被分離,導致在電泳圖上顯示為不同的條帶。
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