生物製品表徵FAQ彙總

• • 分子量約為29KD的目標蛋白透過WB進行鑑定，是否可以直接執行單向 SDS-PAGE，然後切膠進行肽質量指紋圖譜（PMF）？

  使用 SDS-PAGE 分離然後切膠進行 PMF 是完全可行的。但是PMF比對是肽圖譜，存在一定的假陽性機率，所以對蛋白純度要求比較嚴格。因此，建議將 SDS 凝膠跑掉，以確保切出的蛋白凝膠不受其他蛋白凝膠的影響。另外，切膠時要注意不要被角蛋白等雜蛋白汙染。PMF鑑定效率高於N端測序，且價格

• • 宿主細胞蛋白（Host Cell Protein，HCP）檢測的開發流程是怎樣的？

  HCP（Host Cell Protein）檢測開發的整體方法的過程始於定義/選擇合適的抗原，該抗原可以在注入動物樣品（例如兔子、山羊或雞）之前進行表徵和調節。在免疫過程中，徹底檢查動物的效價和特異性免疫反應。特異性抗 HCP 抗體從抗血清中純化出來，並透過二維凝膠電泳（2D-Gel）/蛋白

• • HDX-MS的工作原理是什麼？

  氫氘交換質譜HDX-MS已成為監測溶液中蛋白質結構和動態方面的關鍵技術。這種技術依賴於這樣一個事實，即蛋白質暴露於D(2)O時會在缺乏穩定氫鍵的無序區域中誘導快速的醯胺H→D交換。相關服務:氫氘交換質譜HDX MS

• • 哪些官能團可以發生氫氘交換？

  由於羰基化合物如酮、醛、酯和羧酸中碳鍵氫原子的酸性較高，所以它們以高選擇性(>90%)和產出進行H/D交換。相關服務:氫氘交換質譜HDX MS

• • 質譜分析的肽段覆蓋率是什麼意思？

  蛋白質進行質譜上機分析前，會被酶解為小分子肽段，透過分析肽段來鑑定完整的蛋白質，肽段覆蓋率就是指被鑑定的肽段佔完整蛋白質序列的百分比，肽段覆蓋率越高，蛋白質譜鑑定結果就越準確。相關服務:肽段覆蓋率/肽譜圖分析

• • 什麼是肽段得分？

  肽段得分是用於鑑定來自液相色譜-串聯質譜資料庫搜尋的蛋白質肽段的有用引數，也就是肽段與資料庫中的某個肽段的匹配度，得分越高表示匹配度越高，鑑定結果越準確。相關服務:肽段覆蓋率/肽譜圖分析

• • MALDI-MS為什麼要使用內標？

  用內標做校準可以大大減少MALDI-MS的誤差（<70ppm）從而提高查庫結果和可靠性。相關服務:MALDI TOF分子量分析

• • 好的MALDI-MS內標肽段需要什麼要求？

  1、最好有兩個肽（兩點一線）；2、質量不要在大多數的肽段範圍內（1200～2500 Da）；3、內標的量要與樣品的量成比例；4、內標對其他肽段離子化的抑制要小。相關服務:MALDI TOF分子量分析

• • 去垢劑對MALDI有影響嗎？

  當然有。而且離子型去垢劑對MALDI的影響要比非離子型去垢劑大。去垢劑濃度越高，影響越大。這種影響會大大降低蛋白質的訊號強度。相關服務:MALDI TOF分子量分析

• • 為什麼MALDI圖譜中都是相差111Da的峰？

  有可能樣品在超慮時接觸了聚碸樹脂（polysulfone）的膜。 Polysulfone有四個峰。各個系列的峰之間相差111Da。 相關服務:MALDI TOF分子量分析