將組織樣品分離成單個細胞的最佳做法是什麼？

1.使用適合組織的解離方案：組織分離方法會影響細胞懸浮液的存活率，因此選擇適合組織型別的分離方案非常重要。2.無偏組織取樣：在組織取樣過程中可能會引入細胞型別組成的偏差，從而影響測序結果。確保在將要比較的重複或樣本中對相同區域進行取樣是很重要的。如果一大塊組織僅使用一部分樣品進行單細胞測序，則在二次取樣之前，將分離的組織/細胞懸浮液/細胞核懸浮液徹底混合，以減少回收的細胞型別的偏差。3.樣品QC提供的關於組織質量和分離方法的資訊：評估組織樣本的RIN可能是排除劣質樣本的一種方法，我們建議RIN>7；細胞活力和碎片可指示低效解離或過度消化。如果大塊組織仍然存在，則可能存在無效分離，此時可以使用合適的酶進行解離；或者最佳化解離方法（移液、杵、均質器、攪拌器、粉碎），可能需要增加均質化步驟次數以破碎大組織；對於難以分離成單個細胞的組織（如心臟）考慮核分離；也可以考慮使用細胞過濾器過濾出大碎片。如果存在大量碎片可能是無效解離或過度消化導致的。這是可以用細胞過濾器過濾掉碎屑；或者如果可能的話再加一次洗滌和旋轉；還可以考慮在分離過程中更溫和地處理組織；以及最佳化消化酶和時間。




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