HCP——如果我無法獲得模擬細胞系,或者我的培養條件需要存在大量血清,那麼確定覆蓋率的最佳方法是什麼?
這是一個具有挑戰性的情況。您可以使用以下幾種方法,每種方法都有缺點需要考慮。 1、使用HCP親和柱從樣品中捕獲HCP,然後透過2D凝膠電泳分離以進行DIGE分析。這種方法可以讓您看到檢測到的蛋白質的數量,但是總蛋白質樣品中的血清可能會導致2D凝膠上的HCP難以全部捕捉到,因為血清會掩蓋它們或使凝膠上的HCP難以完全分解。 2、使用親和柱或免疫沉澱與血清特異性抗體從模擬細胞樣品中去除血清可能效果較好,但存在部分 HCP可能與過量血清結合並從樣本中丟失的風險。 3、透過質譜分析確定存在哪些HCP。但是樣品中大量的血清會影響靈敏度,導致丰度較低的HCP難以檢測。 4、在ELISA的捕獲步驟中使用質譜分析。這可以幫助確定您的 ELISA 檢測到了哪些 HCP,但您仍然需要將其與存在的 HCP 總數進行比較。
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