如何分析宿主細胞蛋白？
由於蛋白質藥物中蛋白質濃度的線性動態範圍很寬（覆蓋四到五個數量級），因此 HCP 檢測具有挑戰性。在基因工程藥物的開發和生產過程中，有幾種方法可用於檢測 HCP 和其他雜質。1. 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在 HCPs 分析方法中，anti-HCPs ELISA 被認為是金標準。該方法（檢測蛋白質濃度在 1~100 ppm 範圍內）適用於產品開發和過程控制。然而，與傳統的ELISA不同，anti-HCPs ELISA並不檢測單一靶點，總HCPs“抗原”是一個複雜的蛋白質組。傳統的HCPs抗體制備方法是利用含有空表達載體的宿主細胞製備抗原免疫動物獲得抗血清，分離純化多克隆抗體用於ELISA檢測。在生產HCPs抗體/標準試劑時，要保證生產細胞系和生產工藝的特異性，並準確定量其蛋白濃度。2. 二維凝膠電泳（2-DE）。2-DE 與熒光染色一起使用是另一種常用的 HCP 分析方法。2-DE 通常用於上游或下游工藝開發和表徵。2-DE的原理是根據等電點（第一維）和大小（第二維）分離不同的蛋白質。凝膠中的斑點分析不需要免疫印跡，避免了膜轉移步驟，並且可以從產品中分離出痕量的 HCPs 雜質。但這種方法只能進行半定量分析，因為它的動態範圍很窄（兩到三個數量級），需要結合其他技術（如質譜）來鑑定HCP。3. 質譜（MS）。MS 越來越多地被用於檢測 HCPs，以幫助識別可能的風險因素並評估純化過程。雖然 ELISA 最常用於檢測 HCPs 的總量，但它無法識別超出 ELISA 試劑盒檢測範圍的 HCPs。與傳統的ELISA方法相比，質譜法具有開發時間短、特異性鑑定和定量所有HCPs、無偏檢測所有雜質蛋白、高動態範圍（高達6個數量級），以及快速調整等優點。通用 UPLC/MS 分析可以全面識別和量化生物治療性蛋白質樣品中的 HCP。該分析方法採用線上二維液相色譜分離多肽，然後使用高解析度、高質量和準確的質譜儀進行蛋白質鑑定和定量。平行反應監測（Parallel reaction monitoring，PRM）質譜定量技術可以掃描一個母離子產生的所有子離子，具有較高的識別準確度和定量通量，可以準確識別目標HCPs多肽。
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