生命科學單細胞測序（10×genomics技術）的原理是什麼？
10x Genomics技術是一種革命性的單細胞測序方法，它可以在單細胞解析度水平上獲取基因組、轉錄組和表觀組資料。這種技術的原理包括以下幾個關鍵步驟：
1.單細胞懸浮液製備：
首先，將組織或細胞樣本製備成單細胞懸浮液。這通常透過機械或酶處理來實現。
2.微滴封裝：
將單細胞懸浮液與一種特殊的凝膠珠混合，這些凝膠珠上帶有獨特的分子標籤（barcodes）。利用微流體技術，將單個細胞與一個凝膠珠一起封裝到微滴中。在理想情況下，每個微滴只包含一個細胞和一個凝膠珠。
3.mRNA捕獲和條形碼標記：
細胞在微滴中破裂，釋放出mRNA。mRNA分子與凝膠珠上的寡核苷酸探針結合，這些探針帶有聚A尾（poly-A tail），可以與mRNA的3'端（帶有poly-A尾的端）結合。透過這種結合，mRNA被帶有細胞特異性條形碼和UMI（獨特分子識別符號）的探針捕獲。UMI有助於消除PCR擴增過程中的偏差，並允許更準確地估計原始mRNA分子的數量。
4.逆轉錄和擴增：
捕獲的mRNA被逆轉錄成cDNA，並在微滴中進行PCR擴增。此過程中，細胞特異性條形碼和UMI被保留，並擴增到每個cDNA分子上。
5.cDNA文庫製備：
將擴增的cDNA從微滴中收集，建立一個測序文庫。這個文庫包含了帶有細胞特異性條形碼和UMI的cDNA分子。
6.高通量測序：
利用高通量測序平臺（如Illumina）對cDNA文庫進行測序。測序資料可以用於後續的分析，如基因表達水平、異質性和細胞亞群的鑑定等。
7.資料分析：
對測序資料進行處理和分析，將讀取（reads）分配給不同的細胞，並根據UMI計算基因表達量。
此外，可以使用這些資料進行進一步的生物資訊學分析，例如聚類細胞、尋找差異表達基因和細胞間相互作用的研究。
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