單細胞測序包含哪幾個步驟？

單細胞測序（Single-cell sequencing）是一種研究單個細胞中的基因表達和功能的技術。它在發育生物學、腫瘤生物學、神經科學等領域具有廣泛的應用。單細胞測序通常包含以下幾個主要步驟：




1.單細胞分離：

首先需要從組織或細胞群體中分離單個細胞。這可以透過機械分離、酶促消化或流式細胞術等方法實現。




2.細胞裂解：

將分離得到的單個細胞進行裂解，釋放其中的RNA或DNA。




3.反轉錄：

對於單細胞RNA測序，需要將分離得到的mRNA轉錄為cDNA。這通常透過使用逆轉錄酶進行反轉錄實現。




4.標籤擴增：

爲了獲得足夠的測序材料，需要對cDNA（或DNA）進行擴增。在擴增過程中，透過加入一定的標籤或識別序列，可以將來自不同單細胞的序列進行區分。常用的方法包括線性擴增（如Smart-seq2）或指數擴增（如10x Genomics Chromium系統）。




5.測序文庫構建：

將擴增得到的cDNA（或DNA）進行片段切割、接頭連線和富集，構建適用於高通量測序平臺的測序文庫。




6.高通量測序：

將構建好的測序文庫進行高通量測序，如Illumina、PacBio或Oxford Nanopore等平臺。




7.資料分析：

對測序得到的資料進行質量控制、比對、聚類分析、差異表達分析等，以揭示單細胞層面的基因表達和功能差異。




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