IP與CO-IP實驗步驟指南：從樣本處理到相互作用分析
生物藥物研究中，瞭解蛋白質之間的相互作用對於理解細胞訊號傳導、疾病機制以及藥物研發具有重要意義。免疫沉澱（Immunoprecipitation，簡稱IP）和共免疫沉澱（Co-immunoprecipitation，簡稱CO-IP）是常用的實驗技術，用於檢測蛋白質間的相互作用關係。本文將從樣本處理到相互作用分析，為您詳細介紹IP與CO-IP實驗的步驟與原理。
1. 樣本處理
在進行IP與CO-IP實驗之前，樣本的處理是非常重要的。樣本可以是細胞提取物或組織提取物。以下是樣本處理的步驟：
1.1 細胞培養與收集
首先，將目標細胞培養在適當的培養基中，使其達到合適的生長狀態。然後，使用適當的方法（如洗滌、剝離或裂解）收集細胞。
1.2 細胞裂解
將收集到的細胞進行裂解，以釋放細胞內的蛋白質。常用的裂解方法包括化學裂解、機械裂解和凍融裂解等。
1.3 蛋白質濃度測定
使用蛋白質濃度測定方法，確定裂解後樣本中的蛋白質濃度。這可以幫助您確定用於後續實驗的樣本量。
2. 免疫沉澱（IP）實驗步驟
IP實驗是透過特異性抗體與目標蛋白質結合，然後利用抗體的親和力將目標蛋白質從混合物中沉澱下來。以下是IP實驗的步驟：
圖1
2.1 抗體固定
將特異性抗體固定在適當的固相載體上，如蛋白A/G瓊脂糖或磁珠。這些抗體將與目標蛋白質結合。
2.2 樣本孵育
將裂解後的樣本與固定的抗體孵育，使目標蛋白質與抗體結合。
2.3 免疫沉澱
透過離心或磁力分離的方法，將與抗體結合的目標蛋白質沉澱下來。這一步驟可以去除其他非特異性結合的蛋白質。
2.4 洗滌
洗滌沉澱後的蛋白質，以去除非特異性結合的蛋白質和其他雜質。
2.5 蛋白質析出
將洗滌後的蛋白質從固相載體上析出，以獲得純化的目標蛋白質。
3. 共免疫沉澱（CO-IP）實驗步驟
CO-IP實驗是在IP的基礎上，透過特異性抗體結合的目標蛋白質來尋找與其相互作用的蛋白質。以下是CO-IP實驗的步驟：
3.1 IP實驗
首先，進行IP實驗，將目標蛋白質與特異性抗體結合，並將其沉澱下來。
3.2 洗滌
對IP實驗得到的沉澱物進行洗滌，以去除非特異性結合的蛋白質和其他雜質。
3.3 目標蛋白質的酶解
對洗滌後的沉澱物進行酶解，將目標蛋白質降解為小片段。
3.4 免疫沉澱
使用另一種特異性抗體，將與目標蛋白質相互作用的蛋白質沉澱下來。
3.5 洗滌和蛋白質析出
對免疫沉澱得到的蛋白質進行洗滌和析出，以獲得純化的相互作用蛋白質。
4. 相互作用分析
經過IP與CO-IP實驗後，獲得的純化蛋白質可以用於進一步的相互作用分析。以下是常用的相互作用分析方法：
4.1 免疫印跡（Western blot）
透過免疫印跡技術，可以檢測目標蛋白質與其他蛋白質的相互作用。將純化的蛋白質進行電泳分離，然後使用特異性抗體進行檢測。
圖2
4.2 質譜分析（Mass spectrometry）
質譜分析是一種高靈敏度的方法，可以鑑定蛋白質相互作用的夥伴。透過將純化的蛋白質進行質譜分析，可以確定與目標蛋白質相互作用的其他蛋白質。
4.3 其他方法
除了免疫印跡和質譜分析外，還有許多其他方法可以用於相互作用分析，如熒光共振能量轉移（FRET）、雙雜交技術等。
IP與CO-IP實驗是研究蛋白質相互作用的重要工具。透過樣本處理、免疫沉澱和相互作用分析，我們可以深入瞭解蛋白質間的相互作用關係，為生物藥物研究和疾病機制的解析提供有力支援。
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
How to order?
