iTRAQ定量蛋白組學：從樣本製備到資料解析的實驗注意事項

一、選樣之精準，賦予資料生命

或許你認為每次實驗前的選樣與準備步驟毫無新意，但在iTRAQ定量蛋白組學中，這卻能巧妙賦予資料生命。選擇適合的生物樣品，對疾病的闡釋，對結果的真實性有著深遠影響。選樣期間，我們應儘量減少個體差異而選擇均一的樣品，對樣品的質量嚴格把關。減少干擾因素，讓資料更加清晰。

二、蛋白提取與鑑定，漩渦中尋找真相

只有在適用且準確的手段下，才能找出真實的定量結果。因此，選擇適合的蛋白提取和鑑定方案，確保蛋白的完整性和生物活性，是前期實驗的關鍵。在蛋白提取過程中，要嚴厲抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。精確地鑑定每一種蛋白，是找出疾病發生、發展規律的有效途徑。

三、標籤修飾，演奏生命的樂章

標籤修飾是iTRAQ技術的精華部分，它讓我們有機會生成更可靠的定量資訊。掌握正確的標記方法，省略不必要的標記步驟，既可以節約實驗時間，又可以增加實驗的可重複性。對於標記效率的測定和檢查，也有助於瞭解實驗的進展，及時改正實驗錯誤。

四、實驗操作中的盲點，纔是探索未知的階梯

實驗步驟與細節，似乎微不足道，但卻關乎iTRAQ定量分析的準確性與有效性。尤其是多樣本處理和混合過程中，誤差的控制應當精準到微量。同時，對iTRAQ實驗不同階段的最佳化，無疑可以為整個實驗流程提供更大效率和質量保障。

五、資料解析，揭示定量的真理

資料解析過程中，定量策略的選擇，需要根據實驗目標來定。有時我們關注的是全域性蛋白表達差異，有時又對某特定蛋白的表達差異更感興趣。更重要的是如何優雅地處理實驗中的不可避免差異，在量化結果展示時保持透明度。

本章除了詳述從樣本製備到資料解析的整個實驗流程，還強調了在蛋白定量質量的關鍵：精確的樣本選擇、嚴謹的蛋白提取和鑑定，正確的標記方法，細心的實驗操作，並且，相關的資料解析和展示也應具備透明性。蛋白定量質譜實驗中所有小細節都會影響到結果的一致性和可複製性，因此我們需認識並重視每個步驟，制定出一個科學且有效的蛋白定量策略。

iTRAQ和TMT標籤結構圖