活細胞蛋白互作熱穩定性檢測
活細胞蛋白互作熱穩定性檢測是一種用於研究蛋白質間相互作用及其在不同溫度條件下的穩定性的實驗方法。這種技術在生物醫學研究中尤為重要，因為它可以幫助瞭解蛋白質的功能以及它們在疾病中的作用。以下是這一技術的詳細步驟：
1.細胞培養：
首先，需要培養含有感興趣的蛋白質的細胞。這些細胞可以是自然表達目標蛋白的細胞，或者是經過基因工程改造以表達特定蛋白的細胞。
2.熱處理：
細胞在不同的溫度下處理一定時間。這個步驟的目的是誘導蛋白質的結構變化，包括解離和變性。溫度的選擇取決於研究的特定需求。
3.細胞裂解：
熱處理後，細胞被裂解，釋放其內部的蛋白質。這通常透過新增裂解緩衝液和物理方法（如超聲波處理）來實現。
4.分離和提純：
接著，透過離心等方法分離出未變性的、仍然穩定的蛋白質。這一步驟可以透過收集上清液來完成，因為變性的蛋白質通常會沉澱。
5.蛋白質分析：
最後，使用西方印跡（Western Blot）、質譜分析或其他生物化學方法來分析這些蛋白質。透過比較不同溫度處理的樣本，研究人員可以確定蛋白質的熱穩定性以及它們之間的相互作用。
圖1
這個方法可以揭示在疾病狀態下或在藥物治療期間蛋白質如何相互作用和變化，對於藥物發現和生物醫學研究具有極高的價值。透過這種方法，科學家們可以更好地理解蛋白質的功能以及它們如何在細胞內相互作用。
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