wb法檢測hcp
- 從所研究的生物材料（如細胞培養物）中收集樣品。
- 透過適當的方法（如離心）分離和淨化樣品，以獲取蛋白質提取物。
- 使用蛋白質定量方法（比如Bradford或BCA）測定蛋白濃度。
- 將蛋白質樣品與SDS-PAGE載入緩衝液混合，並在沸水中加熱以使蛋白質變性。
- 將處理過的樣品載入到SDS-PAGE凝膠中，並進行電泳分離。電泳的目的是根據蛋白質的分子量將其分離。
- 將分離的蛋白質從SDS-PAGE凝膠轉移到PVDF或硝酸纖維素膜上。
- 轉移可以透過溼轉移或半乾轉移法完成。
- 使用針對宿主細胞蛋白的特異性抗體（一抗）孵育膜。
- 孵育通常在4°C下過夜或室溫下幾小時進行。
- 使用TBST緩衝液（含Tween-20的Tris緩衝鹽水）清洗膜，以去除非特異性結合的一抗。
- 使用對一抗的物種特異性並帶有檢測標記（如HRP或熒光）的二抗進行孵育。
- 孵育通常在室溫下進行1-2小時。
- 依據二抗的標記，使用化學發光或熒光檢測方法進行蛋白質的視覺化。
- 使用成像系統捕捉膜上的訊號。
HCP（Host Cell Proteins，宿主細胞蛋白）是生物製藥生產中使用的宿主細胞產生的蛋白質，可能會汙染最終的治療產品。檢測和量化HCP是生物製藥開發和生產過程中的重要步驟，因為HCP可能會對藥物的安全性、純度和效力產生不利影響。
WB（Western Blot，免疫印跡）是一種常用的蛋白質檢測技術，可以用於檢測HCP。以下是使用WB法檢測HCP的基本步驟：
1.樣品準備：
2.蛋白質電泳：
3.轉印：
4.封閉：
使用非特異性的蛋白質（如脫脂乳清或BSA）阻塞膜上的未結合位點，以減少非特異性結合。
5.一抗孵育：
6.洗滌：
7.二抗孵育：
8.再次洗滌：
再次使用TBST清洗膜，以去除非特異性結合的二抗。
9.檢測：
需要注意的是，WB法雖然是一種有力的HCP檢測方法，但它可能不能覆蓋所有種類的HCP，尤其是當使用的抗體對某些HCP的識別能力較弱時。因此，它常常與其他檢測方法（如ELISA）結合使用，以獲得更全面和準確的結果。
圖1
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
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