糖基化位點分析流程

糖基化位點（glycosylation site）是蛋白質上被糖基化修飾的特定氨基酸殘基。N-糖基化和O-糖基化是最常見的糖基化修飾，N-糖基化發生在含有氮原子的氨基酸上，通常是天冬醯胺（Asn）殘基。N-糖基化通常遵循特定的序列模式，即“N-X-S/T”（其中X可以是除了脯氨酸之外的任何氨基酸），即天冬醯胺殘基後面緊跟著任意氨基酸，然後是絲氨酸（Ser）或蘇氨酸（Thr）。O-糖基化發生在含有氧原子的氨基酸上，主要是絲氨酸（Ser）或蘇氨酸（Thr）殘基。O-糖基化沒有像N-糖基化那樣嚴格的序列依賴性。糖基化位點的確定通常需要專門的實驗方法，如質譜分析，這個流程包括以下幾個主要步驟：




1.蛋白質樣本的準備：

• 從生物樣本中提取蛋白質，並透過適當的方法進行純化。
• 確保樣本中蛋白質的濃度和質量適合後續的分析。




2.蛋白質的消化：

• 使用特定的酶（如胰蛋白酶）在特定的氨基酸殘基處切割蛋白質，生成肽段。




3.富集糖基化肽段：

• 使用各種層析技術（如講解化層析、親和層析）富集含有糖基化位點的肽段。




4.質譜分析：

• 使用液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）技術對富集後的肽段進行分析。
• 透過質譜資料，鑑定糖基化位點以及可能的糖型結構。




5.數據處理與分析：

• 利用專門的軟體和演算法分析質譜資料，識別糖基化位點。
• 對糖基化位點的型別和分佈進行分析。



圖1




6.生物資訊學分析：

• 利用資料庫和生物資訊學工具，分析糖基化位點在蛋白質結構和功能中的作用。
• 與其他生物標誌物或病理狀態相關聯的糖基化模式分析。




7.驗證實驗：

• 使用其他方法（如免疫印跡、ELISA）對質譜分析結果進行驗證。
• 在生物學模型中測試糖基化位點的功能。




百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商




相關服務： 

糖基化位點分析

N-糖基化位點分析

O-糖基化位點分析

生物藥糖基化位點檢測

糖型分析

生物藥糖譜檢測

糖基化位點及該位點糖型分析

糖基化定量蛋白組學研究

糖蛋白分析