蛋白消光係數測定：生物分析的關鍵引數

蛋白消光係數是衡量蛋白質在特定波長下對光的吸收能力的引數。它對於生物分析非常關鍵，特別是在蛋白質濃度的測定、蛋白質純度的評估以及蛋白質與其他分子相互作用的研究中。




一、定義

蛋白消光係數（也稱為摩爾消光係數）表示在1M的濃度下，蛋白質1 cm厚的溶液在特定波長下的吸光度。其常用單位是M^-1cm^-1或L mol^-1cm^-1。




二、重要性




1.蛋白質濃度測定: 透過測定溶液的吸光度並使用已知的消光係數，可以準確地計算蛋白質的濃度。

2.蛋白質純度評估: 消光係數可以幫助評估蛋白質樣品中可能存在的雜質或汙染物。

3.蛋白質-配體結合研究: 在研究蛋白質與小分子、藥物或其他蛋白質的相互作用時，消光係數可以用於計算結合常數和熱力學引數。




三、 如何測定消光係數




1.理論計算: 基於已知的蛋白質序列，可以預測其在280 nm波長處的消光係數。這主要基於蛋白質中色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸的含量，因為這些氨基酸在280 nm處有強的吸光性。

2.實驗測定: 根據Lambert-Beer定律，當一束單色光透過流動池時，若流動相不吸收光，則吸收度A與吸光組分的濃度C和流動池的光徑長度L成正比。因此，只需測得蛋白的絕對含量和1 cm 光程下供試品在 UV 280 nm 波長下的消光值即可用公式ℇ=A/cl計算蛋白的消光係數。




四、 注意事項




1.蛋白質狀態: 蛋白質的結構、構象或氧化狀態可能會影響其消光係數。

2.雜質: 樣品中的其他物質，如鹽、溶劑或其他雜質，可能會影響吸光度測定。






圖1

 

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