抗體測序的基本流程
抗體測序是一種用於確定單克隆抗體或多克隆抗體中特定抗體分子的氨基酸序列的技術，這爲了解抗體的特異性、活性、結構和與抗原的親和力提供了關鍵資訊，對於抗體工程、疫苗開發、疾病診斷和治療研究非常重要。質譜法是抗體測序的金標準，本期我們也主要介紹基於質譜法進行抗體測序的基本流程。
1.樣品準備：
首先需要準備含有目標抗體的樣品。對於單克隆抗體，這通常涉及到從雜交瘤細胞培養中提取抗體。對於多克隆抗體，可能需要從血清或其他生物流體中提取。
2.抗體純化：
抗體樣品通常需要透過蛋白A、蛋白G或特異性親和柱純化，以去除非特異性蛋白質和其他雜質。
3.裂解和還原：
純化的抗體被裂解成較小的片段，通常是透過還原劑處理以斷開二硫鍵，從而得到單獨的輕鏈和重鏈。
4.胰蛋白酶消化：
使用胰蛋白酶或其他特異性蛋白酶處理裂解後的抗體，產生可進行序列分析的較小肽段。
5.肽段純化和分離：
透過高效液相色譜（HPLC）或類似技術進一步純化和分離所得的肽段。
6.質譜分析：
使用質譜技術（如MALDI-TOF或電噴霧串聯質譜（ESI-MS/MS））對純化的肽段進行分析，以確定它們的質量和序列。
7.序列組裝和分析：
利用生物資訊學工具和資料庫，將質譜資料中獲得的肽段序列資訊組裝成完整的抗體輕鏈和重鏈序列。這可能涉及到比對已知序列資料庫，以識別和註釋序列。
圖1.抗體測序示意圖
需要注意的是，測序的目標可以是抗體的總體（即從多個B細胞獲得的所有抗體）或是單一克隆的抗體。此外，技術和工具的選擇可能會因具體的研究目的和條件而異。
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