Edman法：揭示蛋白質N-末端氨基酸序列的經典生物化學方法
Edman degradation，又稱為Edman sequencing，是一種用於測定蛋白質N-末端氨基酸序列的生物化學方法。這一方法由美國生物化學家Pehr Edman於1950年首次提出，並在隨後的幾十年中不斷改進和應用。Edman法通常用於分析較小的蛋白質或肽段的氨基酸序列，它的主要步驟包括：
圖1.Edman測序反應過程
1.樣品製備：
首先，需要純化目標蛋白質或肽段。通常，蛋白質會被還原為其遊離氨基酸，然後與一種特殊的標記試劑，如Edman試劑（常用的是硫氰酸苯酯，phenyl isothiocyanate）反應形成氨基酸-N-末端的標記化合物。
2.Edman降解：
將標記化合物暴露於酸性條件下，從而導致N-末端氨基酸與Edman試劑發生氨基酸酮衍生物的反應。在此反應中，Edman試劑與目標氨基酸的N-末端氨基基團發生取代反應，形成一個穩定的衍生物。此過程通常進行10到20個氨基酸迴圈，每個迴圈測定一個氨基酸。
3.取代反應：
發生反應的標記化合物會被收集，並透過酸鹼中和將其從反應容器中移除。
4.分析和檢測：
分析和檢測收集到的標記化合物，通常使用高效液相色譜（HPLC）等技術來分離和鑑定氨基酸或氨基酸酮衍生物。然後，可以確定每個迴圈中N-末端的氨基酸。
Edman降解的主要限制在於其適用於較小的蛋白質和肽段，通常在30到50個氨基酸之間。對於較大的蛋白質，可能需要其他序列測定方法，如質譜法（mass spectrometry）。然而，Edman法仍然是研究小型蛋白質和肽段N-末端序列的有用工具，特別是在蛋白質結構和功能研究中。
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