TMT定量蛋白組學實驗流程詳解
- 蛋白質提取：從細胞、組織或生物流體中提取蛋白質。
- 蛋白質濃度測定：使用BCA、Bradford或其他蛋白定量方法測定蛋白質濃度。
- 酶解：常用胰蛋白酶進行酶解，將蛋白質分解成肽段。
- 肽段標記：使用TMT試劑標記肽段。不同的樣本用不同的TMT標籤標記。
- 樣本混合：將不同樣本中標記的肽段混合在一起，以便同時分析。
- 肽段分離：使用高效液相色譜（HPLC）或超高效液相色譜（UPLC）對混合的肽段進行分離。
- MS/MS分析：使用質譜儀進行肽段的質譜分析。TMT標籤允許在MS/MS分析中透過檢測標記離子來定量比較不同樣本中的肽段。
- 質譜數據處理：使用專門的軟體（如Proteome Discoverer、MaxQuant等）處理質譜資料，鑑定肽段和蛋白質，以及進行定量分析。
- 生物資訊學分析：分析蛋白質的表達差異，進行生物學功能註釋、通路和網路分析等。
- 驗證分析：使用Western blot、ELISA等技術對關鍵發現進行驗證。
TMT（Tandem Mass Tag）定量蛋白組學是一種用於定量分析蛋白質表達的先進技術。這種方法透過使用特定的化學標籤來標記蛋白樣本，然後透過質譜分析來比較不同樣本之間的蛋白質表達差異。TMT定量蛋白組學實驗的基本流程如下：
1. 樣品準備
2. 蛋白質消化
3. TMT標記
4. 標記肽段混合
5. 液相色譜分離
6. 質譜分析
7. 數據處理與分析
8. 驗證實驗
圖1.基於TMT的蛋白質組學服務工作流程
TMT定量蛋白組學提供了一種精確和全面的方法來分析蛋白質表達差異，特別是在複雜的生物樣本中。這種技術在疾病機理研究、藥物作用機制分析以及生物標誌物的發現等方面有著廣泛的應用。
百泰派克生物科技——生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
提交需求
How to order?
