探究生物結構:圓二色譜實驗
圓二色光譜(Circular Dichroism, CD)是一種光譜技術,廣泛應用於生物大分子特別是蛋白質和核酸的結構研究。
一、基本原理:
CD光譜測量的是分子對左旋和右旋圓偏振光吸收的差異。這種差異是由分子的手性引起的,也就是說,分子可以存在於兩種映象對稱的形式,這些形式對圓偏振光的吸收不同。手性分子會對一個旋光方向的光吸收更多,從而產生圓二色效應。這種性質在蛋白質和核酸等生物大分子中特別明顯,因為它們具有複雜的三維結構和手性氨基酸殘基。
二、實驗裝置和步驟:
CD光譜儀通常包括光源、單色器、樣品池、檢測器和數據處理系統。在進行CD掃描時,圓偏振光透過含有待測生物大分子的溶液。光經過樣品後,檢測器會測量不同波長的光的吸收情況。通常會測量一系列波長,從而構建出一個光譜圖,顯示了在不同波長下樣品對左旋和右旋圓偏振光吸收的差異。
三、資料解析:
從CD光譜可以得到關於分子二級結構的資訊。例如,蛋白質中的α-螺旋、β-摺疊和無規則捲曲結構會在特定波長產生特徵性的CD訊號。透過對比已知結構的參考光譜,可以對未知樣品進行分析,推測其大致的二級結構組成。CD光譜還可以提供有關蛋白質構象變化的資訊,如溫度、pH或化學變化引起的結構變化。
四、應用領域:
1.蛋白質摺疊和構象變化:
CD可以用於研究蛋白質在不同環境條件下的摺疊狀態,對於理解蛋白質的功能和穩定性至關重要。
2.蛋白-配體相互作用:
透過觀察配體結合引起的CD光譜變化,可以研究蛋白質與小分子、藥物或其他蛋白質的相互作用。
3.蛋白質工程和藥物開發:
CD對於檢驗蛋白質工程中的變體或藥物開發中藥物候選物對目標蛋白的結合有影響的研究是非常有用的工具。
4.核酸研究:
CD不僅限於蛋白質,還可以用於核酸的結構研究,幫助理解DNA和RNA的結構及其與蛋白質等分子的相互作用。
五、優勢和限制:
1.優勢:
CD光譜對樣品的要求較低,可在溶液中進行,不需要複雜的樣品製備。此外,由於是非破壞性分析,可用於研究動態過程。
2.限制:
CD光譜主要提供二級結構的資訊,對於獲得分子的詳細三維結構則有限。同時,對於沒有明顯二級結構的分子或低濃度樣品,檢測可能會受限。
CD是一種強大的工具,對於理解生物大分子的結構和功能,以及它們是如何相互作用和響應環境變化的,具有重要意義。
圖1
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