消光係數測定方法
消光係數是衡量化學物質吸收特定波長光強度的度量單位。蛋白質在280nm的摩爾消光係數幾乎完全取決於芳香族殘基的數量，尤其是色氨酸，並且可以透過氨基酸序列預測。若摩爾消光係數已知，則可用於確定溶液中蛋白質的濃度。常見的可用於測定消光係數的方法是分光光度法，這也是目前大多數生物製品測定消光係數採用的方法。
根據Lambert-Beer定律，當一束單色光透過流動池時，若流動相不吸收光，則吸收度A與吸光組分的濃度C和流動池的光徑長度L成正比。因此，只需測得蛋白的絕對含量和1 cm 光程下供試品在 UV 280 nm 波長下的消光值即可用公式ℇ=A/cl計算蛋白的消光係數。
圖1
以下是一些常用的消光係數測定方法：
1、分光光度法：
這種方法使用分光光度計來測量不同波長的光透過特定樣品時的吸收情況。實驗中，一定濃度的溶液被放置在比色皿中，比色皿被放置在分光光度計的光路中。分光光度計測量透過樣品的光強度與透過參考樣品（通常是純溶劑）的光強度之間的差異，以確定樣品對特定波長光的吸收情況。透過Beer-Lambert定律，可以計算出消光係數。該定律表明，吸光度（A）與物質的濃度（c）、溶液的路徑長度（l）以及物質的消光係數（ε）成正比：A = ε * l * c。
2、透射光譜法：
透射光譜法是一種分析技術，透過測量樣品對一系列不同波長光的透射或吸收特性來確定物質的消光係數。這通常涉及使用光譜儀，該裝置可以提供關於物質如何與不同波長的光相互作用的詳細資訊。透過分析透射光譜，可以計算出特定波長下的消光係數。
3、反射光譜法：
當樣品是固體或者對光的透射性不好時，可以使用反射光譜法來測量消光係數。這種方法測量的是光照射到樣品表面後反射回來的光的強度。透過分析反射光譜，可以間接計算出消光係數。
4、紅外光譜法：
對於某些特定型別的樣品，例如含有特定功能團的有機化合物，紅外光譜法是一種非常有用的方法。該方法依賴於物質對紅外光的吸收特性，這些特性與物質的分子結構有關。透過測量紅外光譜，可以確定特定化學鍵的消光係數。
在進行消光係數的測定時，重要的是要確保使用適當的實驗條件和校正方法，以獲得準確和可重複的結果。此外，樣品的處理、溶劑的純度、溫度和壓力的控制等因素也可能影響測量結果。
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
How to order?
