蛋白等電點怎麼測
蛋白質的等電點(Isoelectric Point, pI)是蛋白質在溶液中呈電中性、淨電荷為零的pH值。測定蛋白質的等電點對於理解蛋白質的化學性質、進行蛋白質純化和分析等方面都是非常重要的。以下是一些用於測定蛋白質等電點的常用方法:
1. 等電聚焦電泳 (IEF)
等電聚焦電泳是一種基於蛋白質在其等電點pH下不遷移的原理的技術。在一個pH梯度的凝膠中,蛋白質將在其等電點位置聚焦。透過知道蛋白質在凝膠中的遷移,可以確定其pI。
2.二維凝膠電泳 (2D-PAGE)
在二維凝膠電泳中,第一維通常是IEF,而第二維是SDS-PAGE。透過比較蛋白質在兩個維度的遷移,可以同時獲取蛋白質的分子量和等電點資訊
3. 計算預測
基於蛋白質的氨基酸序列,可以使用一些線上工具或軟體來計算蛋白質的理論等電點。
4. pH差分法
利用蛋白質在其等電點上淨電荷為零的特性,在不同pH的緩衝液中觀測蛋白質的溶解度或其他性質的變化,找到蛋白質性質發生顯著變化的pH點,即等電點。
5. 毛細管等電聚焦電泳(Capillary Isoelectric Focusing, cIEF)
cIEF是一種微管道等電聚焦技術,在一定範圍內的pH梯度中,蛋白質將在其等電點進行聚焦。該技術允許在較短的時間內獲得關於蛋白質等電點的精確資訊。
圖1
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