Q-TOF肽圖分析步驟

Q-TOF（Quadrupole-Time of Flight）質譜儀是一種集四極杆和飛行時間質譜（TOF）兩種技術於一身的質譜裝置。其結合了四極杆質譜的選擇性離子傳輸和飛行時間質譜的高解析度、高精度測量能力，常用於肽的質譜分析，尤其是蛋白質鑑定和蛋白質組學研究中。Q-TOF質譜對肽段的測定具有高質量精度和高解析度的特點。



圖1

 

Q-TOF肽圖分析的基本步驟大致如下：




1、樣品準備：




• 蛋白質提取：從生物樣品中提取蛋白質。




• 蛋白質消化：使用酶（如胰蛋白酶）將蛋白質消化成肽段。




2、肽段分離：




• HPLC：選擇合適的色譜柱和梯度條件，透過高效液相色譜（HPLC）來分離混合肽段。




3、質譜分析：




• 肽段電離：在Q-TOF離子源中，肽段被電離並轉化為氣態離子。




• 母離子選擇：四極杆選擇特定的母離子進入碰撞單元。




• 碰撞誘導解離：母離子在碰撞單元被加能並解離生成子離子。




• 飛行時間分析：透過TOF分析器測量子離子的m/z值。




4、數據處理與分析：




• 肽段鑑定：透過配對肽段的碎片離子譜和預測的或資料庫中的譜來鑑定肽段序列。




• 蛋白質鑑定：透過關聯鑑定到的肽段來鑑定對應的蛋白質。




• 定量分析：如果進行定量實驗，需要比較不同樣本或條件下肽段的丰度變化。




• 生物資訊學分析：深入挖掘蛋白質和修飾的生物學含義。




5、結果驗證：




（1）覈對鑑定出的蛋白質是否與實驗背景和目的相符。




（2）對重要的蛋白質或肽段進行進一步的驗證實驗，如再次進行質譜分析或其他生物化學實驗。




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