宿主細胞蛋白(HCP)檢測方法及其原理

HCP（Host Cell Proteins，宿主細胞蛋白）是指生物製品生產過程中，來自生產用細胞的蛋白質雜質。例如，當使用哺乳動物細胞（如CHO細胞）生產重組蛋白時，除了目標蛋白外，還可能有一些CHO細胞本身的蛋白存在於最終產品中。這些HCP可能會影響產品的穩定性、效力或安全性，因此需要進行檢測和控制。




以下是HCP檢測的常用方法及其原理：




1、ELISA (酶聯免疫吸附測定法)




（1）原理：特異性抗HCP抗體被固定在酶標板上。待測樣品中的HCP與抗體結合，然後再加入與HCP結合的酶標記的二抗。透過測定酶的活性，可以間接測量HCP的含量。

（2）優點：靈敏，可以量化HCP的總量。

（3）缺點：需要高質量的抗HCP抗體，可能不檢測到所有的HCP雜質。



圖1

2、質譜法




（1）原理：利用質譜儀檢測和鑑定樣品中的蛋白質。

（2）優點：可以鑑定具體的HCP種類，高解析度。

（3）缺點：技術要求高，成本較高，數據處理複雜。




3、免疫印跡 (Western Blot)




（1）原理：先透過凝膠電泳分離蛋白，然後將蛋白轉移到膜上，並使用特異性抗HCP抗體檢測目標HCP。

（2）優點：可以鑑定和定量特定的HCP。

（3）缺點：只能檢測到與使用的抗體有反應的HCP。




4、二維凝膠電泳 (2D-PAGE)




（1）原理：透過兩個方向的凝膠電泳分離蛋白，一維按等電點，二維按分子量，形成蛋白質的二維圖譜。

（2）優點：可以觀察到樣品中所有蛋白的分佈。

（3）缺點：技術要求高，不能直接量化。




在生物製品的開發和生產中，通常會結合多種方法來檢測和控制HCP，以確保產品的質量和安全性。




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