泛素化蛋白檢測

泛素化蛋白檢測是爲了鑑定和量化蛋白質在經過泛素化翻譯後修飾後的狀態。以下是檢測泛素化蛋白的常用方法：



圖1.泛素化修飾研究路線




1、免疫印跡分析 (Western Blot)：

免疫印跡是檢測泛素化蛋白的常用方法。這個過程通常包括：

• 提取蛋白質樣本。
• 使用SDS-PAGE電泳分離蛋白質。
• 將蛋白質轉移到膜上。
• 使用針對泛素的抗體進行檢測，以識別泛素化的蛋白質。




2、免疫沉澱 (Immunoprecipitation, IP)：

• 目的: 富集特定的泛素化目標蛋白。

• 方法: 使用目標蛋白的特異性抗體進行免疫沉澱，然後進行Western blot，使用抗泛素抗體來檢測泛素化。




3、雙免疫沉澱 (Tandem Immunoprecipitation)：

• 目的: 鑑定與目標蛋白相關的特定泛素鏈型別。

• 方法: 首先使用抗泛素鏈特異性抗體（例如抗-K48或抗-K63鏈的抗體）進行沉澱，然後使用目標蛋白的抗體進行第二次沉澱。




4、質譜分析 (Mass Spectrometry)：

• 目的: 鑑定泛素化位點以及泛素鏈的型別。

• 方法: 利用LC-MS/MS技術鑑定泛素化的蛋白質和修飾位點。經常結合酶消化（如Trypsin消化）來產生肽段，然後進行分析。




5、熒光顯微鏡技術

• 使用標記泛素的熒游標籤，觀察泛素化蛋白在細胞中的位置和分佈。這種方法可以用於實時監測泛素化事件。




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