泛素蛋白和泛素化實驗
- 質譜分析: 可以用於鑑定泛素化位點，以及與之相關的泛素鏈型別（例如K48 vs. K63鏈）。
- 免疫印跡（Western Blot）: 使用抗泛素抗體可以檢測特定蛋白質的泛素化水平。
- 免疫共沉澱（Co-immunoprecipitation）: 使用特異性抗體捕獲目標蛋白，然後進行Western blot分析來檢測其泛素化狀態。
- 熒光顯微鏡: 觀察泛素化蛋白質在細胞內的定位和分佈。
1. 泛素蛋白 (Ubiquitin)：
泛素一種高度保守的蛋白質，由76個氨基酸組成，分子量約為8.5 kDa。泛素存在於所有真核細胞中，對於許多細胞過程，尤其是蛋白質的降解和訊號轉導，起著關鍵作用。
2. 泛素化 (Ubiquitination)：
泛素化是一種翻譯後修飾過程，其中泛素蛋白與目標蛋白形成共價鍵。這一過程涉及三種酶：E1泛素啟用酶、E2泛素結合酶和E3泛素連線酶。泛素化可以導致不同的生物學效果，其中最為人所知的是標記蛋白質以供26S蛋白酶體識別和降解。但泛素化也涉及許多其他細胞過程。
圖1. 泛素化修飾研究路線
3.泛素化實驗的目的
1.識別目標蛋白: 確定哪些蛋白質被泛素化。
2.研究泛素化動態: 觀察泛素化過程如何隨時間和條件變化。
3.理解泛素化的功能: 探究泛素化如何影響蛋白質的功能和細胞過程。
4.泛素化實驗的常用技術
泛素蛋白和泛素化是細胞調節的關鍵機制，研究它們對於理解多種細胞過程，包括蛋白降解、細胞訊號傳導和基因表達等都具有重要意義。
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