蛋白質磷酸化水平檢測:方法與應用

    蛋白質磷酸化是一種重要的翻譯後修飾過程,涉及一個磷酸基團新增到蛋白質的某個氨基酸殘基上,通常是絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基。蛋白質磷酸化對調控細胞內各種生物學過程,包括訊號傳導、細胞週期和代謝等方面起著關鍵作用。因此,檢測蛋白質磷酸化水平對研究細胞功能和疾病機制具有重要意義。


    磷酸化定量蛋白組學分析流程

    圖1

     

    一、方法:


    • 免疫印跡(Western Blot):利用磷酸化特異性抗體檢測蛋白質樣本中特定磷酸化位點的水平。

    • 質譜分析:透過質譜技術檢測蛋白質樣本中的磷酸化肽段,可以提供磷酸化位點的確切位置和定量資訊。

    • 免疫沉澱:使用磷酸化特異性抗體沉澱磷酸化蛋白,然後透過免疫印跡或質譜分析檢測。

    • 磷酸酶處理:使用磷酸酶處理蛋白質樣本,透過比較處理前後的磷酸化水平來確定蛋白質的磷酸化狀態。

    • 酶聯免疫吸附測定(ELISA):利用磷酸化特異性抗體對蛋白質樣本中的磷酸化水平進行定量分析。

    二、應用:


    • 訊號傳導研究:透過檢測特定蛋白質的磷酸化水平,可以研究細胞內的訊號傳導通路。

    • 疾病機制研究:蛋白質磷酸化在許多疾病中起著關鍵作用,包括癌症、神經退行性疾病和心血管疾病等,研究這些疾病中蛋白質磷酸化的改變有助於揭示疾病的分子機制。

    • 藥物研發:透過篩選影響蛋白質磷酸化水平的小分子藥物,可以發現潛在的藥物靶點和候選藥物。

    • 生物標誌物發現:磷酸化蛋白質的改變可能與疾病的發生和發展相關,因此它們可以作為疾病診斷或預後的生物標誌物。

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