蛋白體外磷酸化檢測
- 目標蛋白：通常使用純化的蛋白作為實驗的物件。
- 活性蛋白激酶：這是催化蛋白磷酸化的酶。
- 磷酸化供體：通常是γ-32P ATP或γ-33P ATP，它提供放射性標記的磷酸基團。
- 緩衝液：提供適當的pH和離子強度以維持酶的活性。
- 電泳：使用SDS-PAGE電泳來分離蛋白。
- 放射性檢測：如果使用放射性標記的ATP，可以使用X光膠片曝光或磷光成像系統來檢測放射性訊號。
- 染色：可以使用Coomassie藍或銀染來染色膠以顯示蛋白條帶，從而確保蛋白的載入量是一致的。
蛋白質磷酸化是生物體內最重要的翻譯後修飾之一，它涉及到許多生命過程，如細胞週期、訊號轉導、代謝調控等。體外磷酸化檢測作為一種實驗技術，對於我們深入理解蛋白質功能和相關疾病的機制至關重要。
1. 什麼是蛋白質磷酸化？
蛋白質磷酸化是指蛋白質上的特定氨基酸殘基（通常是絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸）與磷酸基團結合的過程。這一過程由蛋白激酶促進，並可以透過蛋白磷酸酶進行逆轉。磷酸化和去磷酸化的動態平衡，決定了蛋白質的活性、定位和功能。
2. 為什麼要進行體外磷酸化檢測？
儘管體內蛋白質磷酸化是非常複雜的，但在實驗室條件下，我們可以透過體外磷酸化實驗模擬這一過程。體外磷酸化提供了一個簡化的環境，允許研究者精確地控制實驗條件，並直接觀察蛋白質的磷酸化狀態。此外，體外磷酸化檢測可以幫助鑑定特定蛋白激酶的底物，從而揭示訊號轉導途徑的細節。
3. 體外磷酸化實驗的基本步驟
1）製備反應混合物:
2）進行反應:
將上述成分混合在一起，然後在適當的溫度下孵育一段時間（例如，30分鐘，37°C）以允許蛋白激酶催化目標蛋白的磷酸化。
3）終止反應:
可以透過新增SDS樣品緩衝液或透過冷凍來終止反應。
4）分析結果:
4. 應用領域
體外磷酸化檢測的技術已經被廣泛應用於多個研究領域。在腫瘤生物學中，研究者使用此技術來了解癌症細胞中的異常訊號轉導。在藥物研發領域，這項技術可以幫助鑑定潛在的藥物靶標，以及評估潛在藥物對特定蛋白激酶的抑制效果。
圖1
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
提交需求
How to order?
