蛋白磷酸化測定
蛋白磷酸化是細胞內重要的訊號轉導機制，涉及許多細胞功能，如生長、分裂、死亡和應答等。磷酸化的蛋白在細胞訊號轉導中起著關鍵作用。因此，研究蛋白磷酸化對於理解細胞生物學和疾病進展是非常重要的。
圖1. 酸化定量蛋白組學分析流程
蛋白磷酸化的測定通常使用以下幾種方法：
1、放射性標記法：
通常使用γ-32P ATP作為放射性磷酸供體，經由蛋白激酶催化，使目標蛋白進行磷酸化。然後，透過放射性測定來檢測蛋白磷酸化的水平。
2、Western blotting：
利用對特定磷酸化位點有特異性的抗體進行檢測。首先，蛋白樣品經過SDS-PAGE電泳分離，然後轉移到PVDF或nitrocellulose膜上，之後用特異的磷酸化抗體進行檢測。
圖2. Far-Western Blot分析
3、質譜法：
透過蛋白或多肽的質譜分析，可以精確地確定蛋白磷酸化的位點和程度。常用的技術包括液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）。
4、Phos-tag凝膠電泳：
Phos-tag是一種能與磷酸化部位結合的化合物。在Phos-tag SDS-PAGE中，磷酸化的蛋白會在凝膠中移動變慢，從而與非磷酸化的蛋白分離。
5、ELISA（酶聯免疫吸附測定法）：
利用磷酸化特異性抗體，可以構建ELISA實驗來測定樣品中磷酸化蛋白的水平。
6、流式細胞儀：
利用磷特異性抗體和熒游標記，可以透過流式細胞儀來分析單細胞水平上的蛋白磷酸化情況。
選擇蛋白磷酸化測定的方法時，需要考慮樣品的性質、所需的敏感度和解析度、可用的儀器裝置以及實驗的預期目標。
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