常用的蛋白質SUMO化檢測方法

蛋白質SUMO化是一個重要的翻譯後修飾過程，涉及小型泛素樣修飾蛋白（SUMO）與目標蛋白質的共價結合。SUMO化對許多生物過程，如核輸運、轉錄調控、細胞週期程序和應激反應等都有重要作用。以下是常用的檢測蛋白質SUMO化的方法：




1.Western Blot：

使用特異性的抗SUMO抗體，可以直接檢測蛋白質是否經過SUMO化修飾。SUMO化通常會導致蛋白分子量的增加，這在電泳分離後可以觀察到。




2.免疫沉澱 (Immunoprecipitation, IP) + Western Blot：

首先利用特異性抗體將目標蛋白從細胞裂解液中沉澱下來，然後進行Western Blot使用抗SUMO抗體檢測其SUMO化狀態。




3.親和純化後的質譜分析：

透過SUMO結合位點的親和純化，可以將SUMO化的蛋白質從複雜的樣品中富集，然後使用質譜法進行鑑定。




4.生物發光共振能量轉移 (BRET)：

在細胞內檢測SUMO化的動態過程。通常涉及將熒光蛋白和螢光蛋白標籤分別連線到目標蛋白和SUMO上，然後透過測量兩者之間的能量轉移來檢測它們的互作。




5.共焦熒光顯微鏡：

使用熒游標記的SUMO和目標蛋白，可以在細胞內直接觀察SUMO化修飾的位置和動態。




6.酶聯免疫吸附實驗 (ELISA)：

使用特異性的抗SUMO抗體，可以進行SUMO化蛋白的定量分析。






圖1

 

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