蛋白質磷酸化修飾的常見檢測方法
- 優點：相對簡單、靈敏；可以定性和定量分析。
- 缺點：需要高特異性的抗體；不能確定精確的磷酸化位點。
- 優點：可以研究蛋白-蛋白相互作用。
- 缺點：需要高質量的抗體；可能會喪失某些弱相互作用。
- 優點：能夠確定精確的磷酸化位點；定量能力強；可鑑定多個磷酸化位點。
- 缺點：裝置昂貴，需要專業知識；樣品處理步驟較多
- 優點：高通量；可以同時檢測多個目標。
- 缺點：可能需要複雜的樣品處理和資料分析。
- 優點：極高的靈敏度且直接檢測。
- 缺點：涉及放射性物質，有健康和安全風險，且無法確定具體磷酸化位點。
- 優點：能夠在單細胞水平上分析；可以結合其他細胞標記進行多引數分析。
- 缺點：需要特異性抗體；僅限於可被懸浮的細胞樣本。
- 優點：適合高通量篩選；定量準確。
- 缺點：需要特異性抗體；只能針對已知的目標進行測試。
蛋白質磷酸化修飾是細胞訊號傳導中的關鍵事件，因此對其進行準確的檢測和定量至關重要。常用的蛋白質磷酸化修飾檢測方法主要有：
1.Western Blot：
利用特異性抗磷酸化位點的抗體來檢測磷酸化蛋白。這種方法可以為特定的磷酸化位點提供半定量資料。
2.免疫沉澱 (Immunoprecipitation, IP)：
首先利用特異性抗體將目標蛋白從細胞裂解液中沉澱下來，然後再進行Western Blot檢測其磷酸化情況。
3.質譜法 (Mass Spectrometry, MS)：
特別適用於鑑定新的磷酸化位點和進行磷酸化蛋白的定量分析。配合液相色譜 (LC-MS/MS) 可以鑑定和定量數千個磷酸化位點。
4.磷酸化蛋白質晶片 (Protein Phosphorylation Arrays)：
這是一種高通量方法，可以在單一實驗中檢測多種蛋白的磷酸化狀態。
5.放射性標記：
例如使用 [^32P]正磷酸酸鈉進行細胞標記，然後對蛋白進行免疫沉澱和電泳，檢測其放射性，以確定蛋白的磷酸化狀態。
6.流式細胞術 (Flow Cytometry)：
使用特異性的磷酸化抗體與熒游標記的二抗，可以在單細胞水平上檢測磷酸化事件。
8.ELISA (酶聯免疫吸附測定)：
使用特異性的磷酸化抗體，可以進行磷酸化蛋白的定量分析。
每種方法都有其優點和侷限性，選擇哪種方法取決於實驗的目的、可用的裝置和樣品的型別。
圖1
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
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