wb檢測蛋白磷酸化水平
蛋白磷酸化是細胞中的關鍵後轉錄修飾，對許多細胞過程，如訊號傳導、代謝和基因表達等，都起到至關重要的調節作用。因此，準確地檢測蛋白磷酸化水平成爲了生命科學領域中的一個重要研究方向。其中，Western Blot（WB）技術因其高靈敏性和準確性，成爲了評估蛋白磷酸化水平的首選方法。
圖1. Far-Western Blot分析
WB技術首先需要透過SDS-PAGE將目標蛋白進行電泳分離。然後，蛋白被轉印到一個高親和性的膜上，如聚偏氟乙烯（PVDF）或硝酸纖維素膜。接著，利用特異性抗體進行蛋白的檢測。爲了檢測蛋白的磷酸化水平，研究者們使用針對特定磷酸化位點的抗體，這樣可以非常具體地定位和量化蛋白的磷酸化狀態。
然而，磷酸化蛋白WB的實驗過程中也存在一些挑戰。首先，確保使用的抗體是高度特異性的非常關鍵，因為背景訊號或交叉反應可能會對結果造成干擾。其次，磷酸化是一個可逆反應，因此樣本的處理和儲存方法需要特別注意，以避免磷酸化水平的人為改變。新增磷酸酯酶抑制劑和進行快速的樣本處理可以幫助維持樣本的磷酸化狀態。
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