O-糖鏈修飾的鑑定與方法
O-糖鏈修飾是一種重要的糖基化形式,其中糖是透過天冬醯胺氧(而非氮)與蛋白質或多肽連線。O-糖的鑑定與N-糖的鑑定有很多相似之處,但也存在一些關鍵的差異。
圖1. O-連線聚糖的不同核心結構
以下是O-糖鑑定的基本步驟:
1、樣品製備:
首先,需要提取目標蛋白或肽段,這通常涉及到樣品的純化。
2、糖酶消化:
爲了從蛋白或肽段上釋放O-糖鏈,可以使用特定的糖酶,如O-糖酶。
3、糖鏈純化:
使用各種色譜技術,如親和色譜或凝膠滲透色譜,將釋放的糖鏈從混合物中純化出來。
4、標記/衍生化:
爲了更好地分析,可以對糖鏈進行標記或衍生化處理,增強其在分析過程中的可視性或穩定性。
5、分析:
常用的技術有液相色譜質譜聯用(LC-MS)和熒游標記後的HPLC。這些技術能夠為研究者提供關於糖鏈結構和組成的詳細資訊。
圖2. 基於質譜的O聚糖分析示意圖
6、資料解析:
根據所得到的資料,解析糖鏈的結構和組成。需要經驗豐富的分析師使用專門的軟體工具進行解讀。
除此之外,還可以使用一些其他的方法輔助O-糖鑑定,如核磁共振(NMR)和西方印跡分析(在糖鏈特異的抗體存在的情況下)。
O-糖鏈的鑑定在生物醫學研究中尤為重要,因為它們在多種疾病狀態,如腫瘤、炎症和某些遺傳疾病中的表現有著重要的作用。
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