Edman 降解法:蛋白質和小肽的N-末端氨基酸序列測定技術

    Edman 降解法是一種用於確定小肽和蛋白質的N-末端氨基酸序列的方法。這種方法是基於週期性地移除肽鏈N-末端的氨基酸並檢測該氨基酸的身份。這個過程可以重複進行,從而連續地確定多個氨基酸的順序。


    Edman降解的大致步驟如下:


    1.肽鍵選擇性標記

    首先,樣品與Edman試劑(酚酞異硫氰酸)反應,這會特異性地與肽的N-末端氨基酸形成一個環狀酞醯化衍生物。


    2.酞醯化衍生物的裂解

    經過酞醯化後,酞醯化氨基酸可以透過溫和的酸性條件(如三氟醋酸)從肽鏈上釋放出來,而不破壞肽鏈上的其它氨基酸。


    3.氨基酸檢測

    釋放的酞醯化氨基酸可以透過色譜法進行分離和檢測,從而確定其身份。


    4.重複過程

    剩餘的肽再次與Edman試劑反應,釋放下一個N-末端的氨基酸,如此反覆進行。


    Edman測序反應過程2

    圖1


    雖然這個方法在確定小肽的序列上很有用,但它有一些侷限性。其中最大的侷限性是它在降解過程中會出現效率損失,這通常使得連續降解超過15-20個氨基酸變得困難。對於較大的蛋白質,通常需要將其分解為較小的片段,然後對這些片段進行Edman降解。


    近年來,由於質譜技術的進步,質譜成爲了蛋白質序列和鑑定的主要工具,但在某些情境下,Edman降解仍然是一個有用的補充方法。


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