蛋白質組學中的資料獨立採集(DIA)資料分析方法
蛋白質組學中的資料獨立採集(Data-Independent Acquisition, DIA)是一種質譜技術,用於高通量、高深度地分析複雜生物樣本中的蛋白質組。它與傳統的資料依賴採集(Data Dependent Acquisition, DDA)方法相比,提供了更全面和可重複的蛋白質組分析。DIA技術在進行蛋白質組分析時,不依賴於預先設定的目標蛋白質或肽段,而是系統地掃描所有可能的質荷比(m/z)範圍,從而捕獲樣本中儘可能多的蛋白質資訊。DIA資料分析的核心步驟和挑戰包括:
1.資料採集:
在DIA模式下,質譜儀會系統地掃描所有質量範圍,而不是僅分析預先選定的前體離子(像在資料依賴採集DDA中)。
這種方法產生的資料包含了樣本中所有肽段的資訊,而不是隻有最丰度的肽段。
2.肽段和蛋白質鑑定:
使用專門的軟體和演算法處理DIA資料,比如Spectronaut、Skyline或MaxQuant,以識別和定量肽段和蛋白質。
這通常涉及與蛋白質或肽段資料庫的匹配,以及使用複雜的訊號處理技術。
3.資料去噪和處理:
DIA資料因其高複雜度,需要有效的去噪和數據處理策略,以提取有意義的生物資訊。
包括訊號強度的校準、峰識別、對齊以及定量分析。
4.生物資訊學分析:
分析所鑑定和定量的蛋白質和肽段,以揭示生物學過程、病理機制或疾病標誌物。
包括功能註釋、通路分析、蛋白質相互作用網路的構建等。
5.統計分析:
進行統計分析以確定蛋白質表達的顯著變化,這對於疾病研究和生物標誌物的鑑定尤為重要。
圖1.DIA定量蛋白質組學
DIA技術在蛋白質組學中提供了一種強大的工具,它允許對樣品進行更全面和深入的分析,但同時也需要高階的分析方法和演算法來處理和解釋資料。
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