完整的單細胞分析通用流程——質控

單細胞分析是指從單個細胞層面對基因表達、蛋白質活動或其他生物分子進行研究的技術。這種分析方法可以揭示細胞異質性和個體細胞之間的細微差異。單細胞分析的一般流程如下。




1.樣本準備：

首先要透過組織解離或流式細胞分選等方法獲取單細胞懸液。




2.單細胞捕獲與逆轉錄：

使用微流控晶片、熒光啟用細胞分選（FACS）或微滴技術等方法捕獲單個細胞，並將細胞內的mRNA轉錄成cDNA。




3.文庫構建與測序：

利用cDNA進行文庫構建，隨後進行高通量測序。




4.質量控制（QC）：

• 細胞質量控制：透過細胞大小、形態、捕獲完整性等指標排除死細胞或損傷細胞。
• RNA質量控制：評估RNA的完整性和濃度，確保mRNA的質量適合後續步驟。
• 序列質量控制：透過軟體工具檢查測序資料的質量，去除低質量的讀段（reads）、接頭序列和汙染物。
• 資料質量控制：排除雙倍體細胞、空滴（未捕獲細胞的微滴）或因技術原因而表達量過低的基因。




5.資料分析：

使用生物資訊學工具進行資料歸一化、細胞型別鑑定、基因表達量分析等。




6.驗證與解釋：

對感興趣的細胞亞群或基因表達模式進行實驗驗證，如使用流式細胞術、免疫熒游標記等方法。




每一個步驟都需要嚴格的質量控制來確保最終結果的準確性和可重複性。尤其是在QC步驟中，對細胞質量、RNA質量和序列質量的控制是至關重要的，它直接影響著資料分析的準確性。




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