基於IEF的蛋白等電點分析

蛋白質分子是兩性電解質，當調節溶液的酸鹼度，使蛋白質分子上所帶的正負電荷相等時，在電場中，該蛋白質分子既不向正極移動，也不向負極移動，這時溶液的pH值，就是該蛋白質的等電點（isoelectric point, pI）。蛋白的等電點與其氨基酸序列和三維結構密切相關，特定蛋白的等電點是固定的，因此可以透過比較不同蛋白質的等電點來研究它們的結構和功能差異，精確測定等電點是生物製品電荷異質性表徵的重要一環。

等電聚焦（Isoelectric Focusing，IEF）是一種非常有效的蛋白質等電點分析技術。其利用等電點處的蛋白質電荷為零的特性，帶電的蛋白質在電泳中向極性相反的方向遷移，當到達其等電點（此處的pH值使相應的蛋白質不再帶電荷）時，電流達到最小，不再移動，從而達到檢測生物製品等電點的目的。百泰派克生物科技（BTP）透過CNAS/ISO9001雙重質量認證體系；公司根據IEF原理，建立了針對於不同類別生物製品的蛋白等電點檢測平臺，可實現對蛋白、抗體、疫苗、多肽、膠原蛋白等的等電點精確測定。

實驗儀器

GE公司的Ettan IPGphor 3

技術應用

基於cIEF的等電點分析，檢測器採集280nm處的吸收峰。對於280nm處無吸收峰的生物製品，例如膠原蛋白，cIEF的方法顯然不太合適。基於IEF的方法是對280nm處無吸收峰蛋白等電點檢測的有效補充，並在膠原蛋白類生物製品和醫療器械表徵中得到廣泛應用。

案例示意

實驗過程中，一根膠條用來測試Marker，對預製膠條的pI分佈情況進行校準，另外一根膠條用來測試樣品；兩個膠條同時進行等電聚焦以減少系統誤差。

左邊為pI marker結果，右邊為膠原蛋白樣品結果

典型問答

問題1：為什麼多數蛋白質的等電點是中性偏酸性？

回答：蛋白質是由氨基酸組成的，而大多數氨基酸等電點小於人體的pH（pH=7.4），故而大多數的蛋白質的等電點偏酸性，如山羊胃蛋白酶等電點約為3。

問題2：有沒有等電點偏鹼性的蛋白質？

回答：存在pI鹼性的蛋白質。當蛋白質中的鹼性氨基酸，如組氨酸，精氨酸、賴氨酸、比列較大，會導致等電點偏鹼性，如魚精蛋白等電點約為12。

問題3：做等電點檢測，兩種檢測方法如何選擇？

回答：基於CIEF的等電點檢測需要樣品具有280nm的紫外吸收；不具有280nm的紫外吸收的樣品（例如膠原蛋白）進行基於IEF的等電點檢測。

中/英文專案報告

在技術報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：

1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的實驗引數（中英文）
3. 基於IEF的蛋白等電點分析詳細資訊
4. 電泳圖片
5. 原始資料