二硫鍵定位分析

二硫鍵是蛋白質中的一個重要結構單元，它是由兩個半胱氨酸氨基酸殘基中的硫原子在氧化環境下形成的，對於生物活性和功能起著決定性作用。二硫鍵廣泛存在於細胞表面受體、抗體、生長因子、激素、酶等蛋白質中，並且容易被還原或發生錯誤配對，導致原始多肽或蛋白質的結構和生物學活性受到影響。二硫鍵定位分析透過確定蛋白質結構中二硫鍵位置和連線方式可以深入瞭解蛋白質的結構和功能。在生物藥物的製備和研發過程中，錯誤的二硫鍵配對可能會導致藥物失效，甚至可能有潛在的安全風險，因此，對二硫鍵進行準確的檢測和控制是生物製品表徵中必不可少的。

圖1 二硫鍵定位分析原理

液相色譜質譜聯用（LC-MS）技術的發展極大提高了檢測的靈敏度和準確性，推動了二硫鍵分析的發展，也在二硫鍵定位分析中發揮著不可替代的作用。百泰派克生物科技BTP透過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證。公司根據二硫鍵分析原理，結合高效液相色譜儀與高解析度質譜儀建立了二硫鍵分析平臺，為您提供精準的二硫鍵定位分析服務，無論鏈內/鏈間二硫鍵、一對/多對二硫鍵、交叉重疊抑或是錯配的二硫鍵，BTP都可進行高效準確的鑑定。歡迎免費諮詢，瞭解更多詳情！

實驗儀器

高效液相色譜儀：Easy-nLC 1200 （Thermo Fisher Scientific）
高分辨質譜儀：Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer（Thermo Fisher Scientific）

案例示意

液相色譜質譜聯用法定位二硫鍵，不進行還原處理，而是直接進行烷基化，這個步驟將遊離的巰基封閉。隨後，進行酶切操作，將蛋白質分子切割成小片段。在這個過程中，存在二硫鍵的半胱氨酸之間形成了特定的連線，導致分子量發生變化。接下來，透過質譜儀採集資料，並使用相應的分析軟體進行資料庫匹配，從而得到二硫鍵的資訊。

表1 二硫鍵分析

Site：形成二硫鍵的半胱氨酸在蛋白中的位置；Enzyme：酶解蛋白所用的酶；Peptide：肽段序列；Peptide_Mass：肽段分子量；Mass_Error(ppm)：肽段的質量偏差

圖2 肽段二級圖

常見問題

問題1：質譜法鑑定二硫鍵的優勢是什麼？

回答：質譜法在鑑定二硫鍵方面具有多個優勢。首先，它不僅可以確定二硫鍵的存在與數量，還能確定二硫鍵的具體位置和相對含量，提供了更詳細的資訊。其次，質譜法具有高靈敏度和高解析度的特點，可以準確地檢測和定量二硫鍵，即使在低濃度下也能獲得可靠的結果。此外，質譜法所需的樣品消耗量相對較少，對於寶貴或有限的樣品而言具有重要意義。因此，質譜法在二硫鍵分析中被廣泛應用，為研究蛋白質結構和功能提供了有力的支援。

問題2：為什麼要進行烷基化？

回答：進行烷基化是爲了封閉遊離巰基，防止實驗過程中二硫鍵發生錯配。在質譜分析中，樣品的製備過程需要進行特殊處理，其中包括烷基化步驟。烷基化是透過將烷基化試劑與巰基反應，使巰基被烷基取代，形成烷基硫醇。這樣可以有效地阻止巰基之間的反應，避免在實驗過程中形成不正常的二硫鍵連線或錯配。透過烷基化處理，可以確保在質譜分析中得到準確而可靠的二硫鍵資訊，有助於揭示蛋白質的結構和功能特徵。

中/英文專案報告

在技術報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：

1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的質譜引數（中英文）
3. 二硫鍵定位分析詳細資訊
4. 質譜圖片
5. 原始資料