基於SDS-PAGE的蛋白分離
十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯氨凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）在蛋白表達分析等科研工作中經常用到。可用於獲取蛋白質樣品的電泳圖譜，結合其它基於質譜的蛋白質鑑定服務對樣品進行分析或純化，用於複雜生物樣品的蛋白質譜分析。
百泰派克生物科技可根據您的需求，提供基於1D SDS-PAGE或2D SDS-PAGE的蛋白分離服務：基於我司最佳化的標準操作流程，使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝膠系統進行1D SDS-PAGE蛋白質分離。將蛋白樣品（5-20 ug）用上樣緩衝液稀釋到一定濃度並加熱（沸水浴5 min），根據樣品的分析目的選擇適當濃度的凝膠並將樣品上樣到凝膠孔中，加入電泳緩衝液，首先在80V電壓下恆壓分離15 min，然後在120V電壓下恆壓分離60 min。分離後卸下膠板，將凝膠用考馬斯亮藍染色或銀染染色。
2D SDS-PAGE蛋白分離使用IPG (pH 3-10)膠進行一維等電點聚焦，SDS-PAGE膠二維電泳進行Mw分離，實現蛋白分離。樣品首先使用超濾管進行純化，並將溶液體系替換為2D lysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 M thiourea and 4% CHAPS)進行等電點聚焦。聚焦好的膠條膠面朝上放在乾的厚濾紙上，擠去多餘水分、礦物油及多餘樣品，用緩衝液溶脹15 min後，將膠條繼續在平衡緩衝液中平衡15 min。將膠條膠面朝上放在凝膠的長玻璃板上，使用低熔點瓊脂糖封膠後，將凝膠轉移至電泳槽中，起始使用低電壓，待樣品在完全走出IPG膠條，濃縮成一條線後，加大電壓，待溴酚藍指示劑達到底部邊緣時即可停止電泳。卸下膠板，將凝膠用考馬斯亮藍染色、銀染染色或熒光染色。使用Typhoon TRIO (GE Healthcare)對膠圖進行掃描，掃描得到的膠圖透過Image Quant software (version 6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)進行分析。
2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30 µg蛋白，2D SDS-PAGE一般需要50-1000 µg蛋白；
3. 考馬斯亮藍染色、銀染染色或熒光染色的蛋白質均可。
百泰派克生物科技可根據您的需求，提供基於1D SDS-PAGE或2D SDS-PAGE的蛋白分離服務：基於我司最佳化的標準操作流程，使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝膠系統進行1D SDS-PAGE蛋白質分離。將蛋白樣品（5-20 ug）用上樣緩衝液稀釋到一定濃度並加熱（沸水浴5 min），根據樣品的分析目的選擇適當濃度的凝膠並將樣品上樣到凝膠孔中，加入電泳緩衝液，首先在80V電壓下恆壓分離15 min，然後在120V電壓下恆壓分離60 min。分離後卸下膠板，將凝膠用考馬斯亮藍染色或銀染染色。
2D SDS-PAGE蛋白分離使用IPG (pH 3-10)膠進行一維等電點聚焦，SDS-PAGE膠二維電泳進行Mw分離，實現蛋白分離。樣品首先使用超濾管進行純化，並將溶液體系替換為2D lysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 M thiourea and 4% CHAPS)進行等電點聚焦。聚焦好的膠條膠面朝上放在乾的厚濾紙上，擠去多餘水分、礦物油及多餘樣品，用緩衝液溶脹15 min後，將膠條繼續在平衡緩衝液中平衡15 min。將膠條膠面朝上放在凝膠的長玻璃板上，使用低熔點瓊脂糖封膠後，將凝膠轉移至電泳槽中，起始使用低電壓，待樣品在完全走出IPG膠條，濃縮成一條線後，加大電壓，待溴酚藍指示劑達到底部邊緣時即可停止電泳。卸下膠板，將凝膠用考馬斯亮藍染色、銀染染色或熒光染色。使用Typhoon TRIO (GE Healthcare)對膠圖進行掃描，掃描得到的膠圖透過Image Quant software (version 6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)進行分析。
百泰派克2D SDS-PAGE示例
關於樣品：
1. 液體或固體樣品均可；2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30 µg蛋白，2D SDS-PAGE一般需要50-1000 µg蛋白；
3. 考馬斯亮藍染色、銀染染色或熒光染色的蛋白質均可。
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